• page_banner

Jaunumi

Javascript pašlaik ir atspējots jūsu pārlūkprogrammā.Dažas šīs vietnes funkcijas nedarbosies, ja JavaScript ir atspējots.
Reģistrējieties ar savu konkrēto informāciju un interesējošo narkotiku, un mēs saskaņosim jūsu sniegto informāciju ar rakstiem mūsu plašajā datubāzē un nekavējoties nosūtīsim jums PDF kopiju.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Infekcijas slimību nodaļa, Sudžou Universitātes pirmā saistītā slimnīca, Sudžou pilsēta, Dzjansu province, 215000 Tālr.gremošanas sistēmas audzēji ar 5 gadu kopējo dzīvildzi 14,1%.Daudzi pacienti ar HCC tiek diagnosticēti vēlīnā stadijā, tāpēc agrīna skrīnings ir būtisks, lai samazinātu mirstību no HCC.Papildus parasti izmantotajiem noteikšanas indikatoriem, piemēram, seruma alfa-fetoproteīnam (AFP), lēcas lektīnam reaģējošam alfa-fetoproteīnam (AFP-L3) un patoloģiskam protrombīnam (K vitamīna deficīta izraisīts proteīns II, PIVKA-II), šķidruma biopsijas metodēm Ir pierādīts, ka tam ir diagnostiska vērtība HCC noteikšanā.Salīdzinot ar invazīvām procedūrām, šķidruma biopsija var noteikt cirkulējošos ļaundabīgos metabolītus.Šķidruma biopsijas metodes nosaka cirkulējošās audzēja šūnas, cirkulējošo audzēja DNS, cirkulējošo RNS un eksosomas, un tos izmanto agrīnai HCC skrīningam, diagnostikai un prognostiskajai novērtēšanai.Šajā rakstā ir apskatīta molekulārā bioloģija un dažādu šķidruma biopsijas metožu pielietojums, lai izolētu daudzsološus biomarķierus, kas varētu būt dzīvotspējīgas iespējas agrīnai HCC novērtēšanai, lai uzlabotu augsta riska HCC grupu agrīnu skrīningu.Atslēgas vārdi: šķidruma biopsijas tehnika, hepatocelulārā karcinoma, augsta riska grupa.
Hepatocelulārā karcinoma (HCC) ir izplatīts gremošanas trakta ļaundabīgs audzējs, kas ieņem sesto vietu starp jaunajiem ļaundabīgo audzēju gadījumiem gan vīriešiem, gan sievietēm.1 Visā pasaulē aknu vēzis ir trešais galvenais vēža izraisīto nāves cēlonis pēc plaušu un kolorektālā vēža, veidojot 8,3% ar vēzi saistīto nāves gadījumu no visiem ļaundabīgiem audzējiem.1 HCC prognoze ir cieši saistīta ar diagnozes stadiju.Galvenie HCC sliktas izdzīvošanas iemesli ir intrahepatiskas metastāzes, portāla vēnu audzēja trombi un attālas metastāzes, kas izslēdz rezekciju, un daudzas no šīm pazīmēm jau ir pacientiem diagnozes laikā.
Pamatojoties uz diagnostikas un ārstēšanas vadlīnijām, galvenie riska faktori HCC attīstībai ir aknu ciroze, hroniska B hepatīta vīrusa (HBV) vai C hepatīta vīrusa (HCV) infekcija, alkohola izraisīta taukainu aknu slimība un bezalkoholiskā taukaino aknu slimība (NAFLD). ).2 Turklāt HCC riska faktori ietver ar aflatoksīnu piesārņotu pārtiku, šistosomiāzi, citus cirozes cēloņus, aknu vēža ģimenes anamnēzi, diabētu, aptaukošanos, smēķēšanu un zāļu izraisītus aknu bojājumus.35 un 45 gadus vecām augsta riska grupām regulāri jāveic medicīniskās pārbaudes.Agrīna skrīnings ir svarīga agrīnas ārstēšanas stratēģija, lai uzlabotu HCC pacientu vispārējo dzīvildzi.
Biomarķieri, piemēram, AFP, AFP-L3 un PIVKA-II, ir ieteicami agrīnai HCC3,4 skrīningam.Šķidrās biopsijas metodes ir parādījušas daudzsološus rezultātus agrīnā diagnostikā un ārstēšanas novērtēšanā.5,6 Ievērojams progress ir panākts HCC šķidruma biopsijā, kurai var būt augstāka jutība un specifiskums nekā parasti lietotajiem seruma marķieriem, piemēram, AFP (1. tabula).
AFP ir plaši izmantots biomarķieris HCC, un pašlaik tas ir visdetalizētākais biomarķieris, ko plaši izmanto slimības agrīnai skrīningam, diagnostikai un novērtēšanai.Pastāvīgi paaugstināts AFP līmenis tiek uzskatīts par HCC progresēšanas riska faktoru.7,8 Mazas hepatocelulārās karcinomas (sHCC) noteikšanas ātrums palielinās līdz ar ultraskaņas un datortomogrāfijas attīstību, un ir konstatēts, ka AFP ir īpaši nejutīgs pret hHCC noteikšanu klīniskajā praksē.Saskaņā ar retrospektīvu daudzcentru pētījumu9 AFP pozitīvs tika konstatēts 46% (616/1338) HCC gadījumu un 23,4% (150/641) sHCC gadījumu.Turklāt AFP līmenis ir paaugstināts pacientiem ar hronisku aknu slimību un cirozi.10 Tādējādi AFP ir ierobežots sHCC skrīninga efekts.11 Saskaņā ar Āzijas un Klusā okeāna reģiona hepatocelulārās karcinomas klīniskās prakses vadlīnijām AFP lietošana nav ieteicama.12 Klīniskie pierādījumi liecina, ka PIVKA-II ir pārāka par AFP HCC ārstēšanā un ka PIVKA-II un AFP kombinācijai ir augstāka diagnostikas vērtība HCC.13 Salīdzinot ar audu biopsiju, šķidruma biopsija galvenokārt atklāj ar audzēju saistītus metabolītus ķermeņa šķidrumos (asinīs, siekalās, pleiras šķidrumā, cerebrospinālajā šķidrumā vai urīnā) un ir mazāk invazīva audos.14 Turklāt šķidrās biopsijas var atspoguļot ļaundabīgas pazīmes, kuras nav primārajos audzēja audos.15 Šķidrās biopsijas klīniskajā praksē vēl netiek pārbaudītas visu veidu audzējiem, taču to diagnostiskais potenciāls vēža ārstēšanā piesaista onkologu uzmanību.16 Šķidruma biopsija var noteikt cirkulējošās audzēja šūnas (CTC), cirkulējošo audzēja DNS (cDNS), cirkulējošo brīvo RNS (ecRNS) un eksosomas.Šajā rakstā mēs apspriedīsim dažādu šķidruma biopsijas metožu īpašības, lomu un pielietojumu augsta riska HCC grupu agrīnā skrīningā.
Ekstracelulāro DNS (cfDNS) asins paraugos no veseliem indivīdiem pirmo reizi aprakstīja 1948. gadā Mandel et al.17 cfDNS ir bezšūnu DNS fragments, kura garums ir aptuveni 160–180 bp un kura izcelsme galvenokārt ir no limfocītiem un mieloīdām šūnām.ctDNS ir specifisks mutants DNS fragments, ko audzēja šūnas izdala perifērajās asinīs un kas atspoguļo audzēja šūnu genoma informāciju pēc noteiktiem patofizioloģiskiem procesiem, tostarp nekrozes, apoptozes un ekskrēcijas.CtDNS īpatsvars kopējā cfDNS ļoti atšķiras atkarībā no audzēja veida, un tiek ziņots, ka cDNS fragmenti parasti ir mazāki par 167 bp.18 Underhill pētījums parādīja, ka cfDNS fragmenti parasti ir īsāki par parasto cfDNS.19 Salīdzinot ar veseliem indivīdiem, kopējais cfDNS fragmentu garums vēža slimnieku asinīs ir mazāks, tāpēc cfDNS var izmantot kā agrīnas audzēja skrīninga indikatoru.Dažu cfDNS fragmentu garumu apakškopu bagātināšana var uzlabot ar nemetastātiskiem cietiem audzējiem saistītās cDNS noteikšanu.Pētījumi liecina, ka ctDNS ir atrodams vairāk nekā 75% progresējošu aizkuņģa dziedzera, resnās zarnas, urīnpūšļa, kuņģa-zarnu trakta, aknu, olnīcu, krūts, melanomas un galvas un kakla vēža gadījumu.20,21 Tomēr ctDNS daudzums asinīs ir atkarīgs no audzēja atrašanās vietas.22 Bettegoud pētījumā pacientiem ar kolorektālo, krūts, aknu, plaušu un prostatas vēzi tika konstatēts augstāks cDNS līmenis asinīs nekā citiem vēža veidiem.Turpretim pacientiem ar mutes vēzi, aizkuņģa dziedzera vēzi, kuņģa vēzi un gliomu cDNS koncentrācija asinīs bija zemāka.divdesmitviens
Tā kā ctDNS satur tādas pašas ģenētiskās mutācijas kā primārās audzēja šūnas, cDNS var izmantot, lai noteiktu heterogēnas audzējam specifiskas mutācijas un epiģenētiskas izmaiņas, tostarp metilēšanu, hidroksimetilāciju, viena nukleotīda variācijas un kopiju skaita variācijas.divdesmit trīs
DNS metilēšana ir viena no visbiežāk sastopamajām epiģenētiskajām izmaiņām, kas izraisa gēnu represijas.Salīdzinot ar normālām šūnām, pastāv atšķirības kopējā audzēja šūnu genoma metilēšanas līmenī, īpaši audzēja supresoru gēnu metilēšanā, ko var noteikt agrīnā stadijā, kas liecina, ka izmaiņas DNS metilēšanā var būt agrīnas attīstības indikators. audzēja ģenēzes noteikšana.Audzēja supresoru gēnus, kas saistīti ar HCC, var inaktivēt ar promotora metilēšanu, tādējādi stimulējot audzēja ģenēzi.24 DNS metilēšana ir ideāls marķieris audzēju agrīnai diagnostikai tās audu specifikas, nosakāmības un vecuma neatkarības dēļ.Turklāt DNS metilēšana ir biežāka salīdzinājumā ar somatiskajām mutācijām, jo ​​katrā mērķa genoma reģionā ir vairāk mērķa reģionu un vairākas izmainītas CpG vietas.25 Papildus vairākām CpG vietām ctDNS ir identificēts liels skaits neatkarīgu hipermetilētu lokusu DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 un RGS10.26 Xu et al.Salīdzinot cfDNS paraugus no 1098 HCC pacientiem un 835 veselām kontrolēm, tika konstatēts, ka ar HCC saistītie gēni cieši korelē ar atbilstošajiem plazmas cDNS metilēšanas parakstiem.25 Pamatojoties uz laboratorijas analīzi, tika izstrādāts prognozēšanas modelis, kas satur 10 metilēšanas marķierus ar attiecīgi 85,7% un 94,3% jutīgumu un specifiskumu, un šie marķieri bija ļoti korelēti ar audzēja masu, audzēja stadiju un reakciju uz ārstēšanu.Šie rezultāti liecina, ka cDNS metilēšanas marķieru izmantošanai ir liels solījums HCC diagnostikā, uzraudzībā un prognozēšanā.Metilēšanas modelī, kas sastāv no trim neparasti metilētiem gēniem (APC, COX2, RASSF1A) un viena miRNS (miR203), ko prezentēja Lu et al27, modeļa 27 jutība un specifika ar HBV saistītā HCC diagnosticēšanai bija salīdzināma.80%.Turklāt modelis varēja noteikt 75% nediagnosticētu HCC pacientu ar AFP līmeni 20 ng / ml.Ar Ras saistītā domēna ģimenes 1A proteīna (RASSF1A) gēns ir galvenā atkārtotā DNS secība cilvēka genomā.Araujo et al.secināja, ka RASSF1A promotora hipermetilācija varētu būt vērtīgs biomarķieris agrīnai HCC skrīningam un potenciāls molekulārais mērķis epiģenētiskai terapijai.28 Vienā pētījumā seruma RASSF1A promotora hipermetilācija tika konstatēta 73,3% pacientu ar HCC.29 Ilgi mijas nukleotīdu elements 1 (LINE-1) ir vēl viens ļoti aktīvs retrotranspozīcijas starpnieks.LINE-1 hipometilācija tika konstatēta 66, 7% HCC seruma paraugu DNS, un tā bija saistīta ar agrīnu recidīvu un sliktu izdzīvošanu pēc radikālas rezekcijas.29 Hipermetilācija ir izplatīts ģenētisks process, kam ir unikāla loma aknu cirozes un HCC attīstībā.30 Turpretim hidroksimetilēšana ir demetilēšanas process, kas izraisa gēnu reaktivāciju un ekspresiju, un 5-hidroksimetilcitozīna (5-hmC) produkta noteikšanu šajā procesā var izmantot, lai identificētu audzēju.cDNS metilēšana un hidroksimetilēšana ir saistīta ar audzēja ģenēzi un var veicināt agrīnu HCC skrīningu.Pētījumā ar 2554 subjektiem cfDNS paraugos tika atrasts 31 genoma mēroga 5-hmC, un, salīdzinot 5-hmC sekvences HCC pacientiem un augsta riska grupām, piemēram, ar hroniskām slimībām, tika identificēti 32 gēni.Aknu slimību diagnostikas modeļi.un ciroze.Šis modelis bija pārāks par AFP, atšķirot HCC no audiem, kas nav audzēji.
Mutācijas kodējošajos reģionos var izraisīt transkripcijas anomālijas, kas var izraisīt izmaiņas olbaltumvielu sekvencēs un galu galā vēzi.Viena nukleotīda varianti ir svarīgi genoma marķieri agrīnai audzēju skrīningam, jo ​​tiem ir augsta audu uzticamība un augsta audzēja un audu specifika.Daudzi ar HCC saistīti pētījumi, izmantojot nākamās paaudzes sekvencēšanu (NGS) vēža eksomu un visa genoma sekvencēšanai, ir identificējuši tādus izplatītus mutētus šūnu gēnus kā TP53 un CTNNB1, kā arī vairākus, tostarp ARID1A, MLL, IRF2.Jaunie gēni ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 un JAK1 uzrāda mērenu mutāciju līmeni. Mutantu gēnu funkciju analīze liecina, ka izmaiņas hromatīna pārveidošanā, Wnt/β-katenīna un JAK/STAT signālu pārvadē, P53-šūnu cikla ceļā, epiģenētiskajos modifikatoros, oksidatīvā stresa ceļos, PI3K/AKT/MTOR ceļā un RAS/RAF/ MAPK kināzes ceļam ir izšķiroša nozīme HCC onkoģenēzē.32,33 Pētījumā, kurā tika atklātas ar audzēju saistītas mutācijas, Huang et al atklāja, ka ar audzēju saistīto mutāciju biežums, kas ir atkarīgs no ctDNS, bija 19,5% un specifiskums bija 90%. .34 Turklāt pacientiem, kuriem bija asinsvadu invāzija, biežāk bija ctDNS mutācijas (P=0,041) un īsāka dzīvildze bez recidīviem (P<0,001). Mutantu gēnu funkciju analīze liecina, ka izmaiņas hromatīna pārveidošanā, Wnt/β-katenīna un JAK/STAT signālu pārvadē, P53-šūnu cikla ceļā, epiģenētiskajos modifikatoros, oksidatīvā stresa ceļos, PI3K/AKT/MTOR ceļā un RAS/RAF/ MAPK kināzes ceļam ir izšķiroša nozīme HCC onkoģenēzē.32,33 Pētījumā, kurā tika atklātas ar audzēju saistītas mutācijas, Huang et al atklāja, ka ar audzēju saistīto mutāciju biežums, kas ir atkarīgs no ctDNS, bija 19,5% un specifiskums bija 90%. .34 Turklāt pacientiem, kuriem bija asinsvadu invāzija, biežāk bija ctDNS mutācijas (P=0,041) un īsāka dzīvildze bez recidīviem (P<0,001).Mutantu gēnu funkciju analīze liecina, ka izmaiņas hromatīna remodelācijā, Wnt/β-katenīna un JAK/STAT signalizācijā, P53 šūnu cikla ceļā, epiģenētiskajos modifikatoros, oksidatīvā stresa ceļos, PI3K/AKT/MTOR ceļā un RAS/RAF/MAPK kināzes ceļā. kritiska loma HCC audzēja veidošanās procesā.32,33 Pētījumā, kurā tika konstatētas ar audzēju saistītas mutācijas, Huang et al.konstatēja, ka no ctDNS atkarīgo ar audzēju saistīto mutāciju biežums bija 19, 5% un specifiskums bija 90%..34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДДНК,0жвроцна. .34 Turklāt pacientiem ar asinsvadu invāziju bija vairāk cDNS mutāciju (P=0,041) un īsāka dzīvildze bez slimībām (P<0,001).Mutantu gēnu funkcionālā analīze atklāja hromatīna remodelāciju, Wnt/β-katenīna un JAK/STAT signālu pārraidi, P53 šūnu cikla ceļu, epiģenētiskos modifikatorus, oksidatīvā stresa ceļu, PI3K/AKT/MTOR ceļu un RAS/RAF/MAPK. kināzes ceļam ir izšķiroša loma HCC onkoģenēzē. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 中 中 , huang 等 人 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctDna 的 频率 为 19,5% , 特异性 为 90% .34 此外 , 经历 血管 的 的 患者 患者 更 有 发生 ctdnaNna , 经历 侵犯 的 患者 患者 患者 更 发生 发生 ctdnaNna , 经历 侵犯 的 患者 患者 更.突变(P=0,041)和更短的无复发生存期(P<0,001). 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 , huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% , 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变(P=0.041)和更短的无复发生存期(P<0,001).32,33 Pētījumā, kurā tika konstatētas ar audzēju saistītas mutācijas, Huang et al.atklāja, ka ar audzēju saistītās mutācijas bija 19,5% atkarīgas no cDNS ar specifiskumu 90% 34. Turklāt pacientiem, kuriem bija veikta asinsvadu invāzija, bija lielāka iespēja attīstīt cDNS.мутация (P = 0,041) un более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutāciju (P=0,041) un īsāku dzīvildzi bez slimībām (P<0,001).Vēl viens izplatīts HCC draivera gēns ir TP53, kura mutāciju līmenis pārsniedz 30%.Pētījumi liecina, ka TP53 mutāciju biežums ctDNS asinīs un urīnā svārstās no 5% līdz 60%.35 Johana pētījums parādīja, ka ctDNS mutāciju spektram vēlīnā HCC ir līdzīgs mutāciju līmenis kā agrīnā HCC, ieskaitot TERT promotoru (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutācijas AXIN1 ., ARID2, KMT2D un TSC2 (katrs 6%).36 β-katenīna (CTNNB1) onkogēnam ir svarīga loma Wnt signalizācijas ceļā.Transkripcijas koaktivators CTNNB1 var veicināt gēnu ekspresiju, kas var izraisīt šūnu proliferāciju, apoptozes inhibīciju un angiogenēzi.CTNNB1 var arī mijiedarboties ar TERT, lai izraisītu hepatocītu transformāciju.33 Dažos cietos audzējos TERT promotors bieži tiek mutēts.Izmaiņas TERT, kas ir viena no agrākajām ģenētiskajām izmaiņām HCC ļaundabīgā transformācijā, var izraisīt telomerāzes reaktivāciju cirozes hepatocītos un var veicināt proliferāciju un novērst novecošanos.Ir ziņots, ka 33-37 TERT promotora mutācijas rodas 59-90% pacientu ar proliferatīviem aknu mezgliņiem un agrīnu HCC, un tās ir saistītas ar izdzīvošanu.38
Kopiju skaita izmaiņas (CNA) ir svarīgs somatisko mutāciju apakštips.Pētījumi ir parādījuši, ka plaši izplatītais un fokālais CNS slogs ir genoma paraksts, kas spēj paredzēt audzēja imūnsistēmas infiltrāciju un izslēgšanu dažos vēža veidos.39 Aktīvā infiltrācijas signalizācija, augsta citolītiskā aktivitāte, smags iekaisums un ģenētiskie marķieri, kas saistīti ar antigēna prezentāciju HCC.Viena nukleotīda polimorfismu datu masīva analīze 477 subjektiem atklāja zemu slogu CNS.Turpretim hromosomāli nestabiliem audzējiem ar lielu plašu CNS slodzi bija imūnās atgrūšanas pazīmes un tie bija saistīti ar proliferāciju, DNS atjaunošanos un TP53 disfunkciju.Xu et al.parādīja, ka HCC grupai bija augstāki CNA rādītāji nekā hronisku aknu slimību grupai.40 Izmantojot vienas šūnas visa genoma sekvencēšanu, tika konstatēts, ka CNS parādās agrīnā hepatokarcinoģenēzes stadijā un saglabājas relatīvi stabilas audzēja progresēšanas laikā.41 Chung et al.atklāja, ka cfDNS līmenis bija ievērojami paaugstināts HCC pacientiem un ka genoma mēroga CNS cfDNS bija svarīgs neatkarīgs prognostiskais marķieris HCC pacientiem, kuri tika ārstēti ar sorafenibu.42 Pacientiem ar lielāku CNS slodzi bija lielāka slimības progresēšanas un nāves iespējamība nekā tiem, kuriem CNS slodze bija mazāka.Ollerich et al.atklāja, ka kopiju skaita nestabilitātes indeksu (CNI) var izmantot, lai novērtētu CNS vēža pacientu cfDNS.Viņi atzīmēja, ka pacientiem ar progresējošu vēzi bija ievērojami augstāki CNI rādītāji nekā kontroles grupai, kas novērtē pacienta reakciju uz sistēmisku ķīmijterapiju un imūnterapiju.43 Šie rezultāti liecina, ka šķidros biopsijas paraugos atrastās CNS var kalpot kā prognostiski indikatori pacientiem ar progresējošu vēzi.HCC uz sistēmiskās terapijas fona.
Pašlaik metodes, ko izmanto ctDNS noteikšanai, var iedalīt mērķtiecīgās un nemērķētās metodēs.Īsumā, tādas mērķtiecīgas metodes kā digitālā polimerāzes ķēdes reakcija (dPCR), BEAMing digitālā PCR, amplifikācijas ugunsizturīgo mutāciju sistēma-PCR, Capp-Seq un Tam-Seq ir ļoti jutīgas pret iepriekš noteiktiem gēniem.Ārpus mērķa metodes, piemēram, visa genoma sekvencēšana un NGS, sniedz visaptverošu priekšstatu par visu genoma ainavu.44 Salīdzinot ar mērķa paneļiem, visa genoma sekvencēšana var noteikt ne tikai punktu mutācijas un ievietošanu, bet arī pārkārtojumus un kopiju skaita variācijas.prognoze, un CTC un cfDNA ir labi rādītāji, kurus var izmantot dinamiskai HCC uzraudzībai.45 Turklāt cfDNS analīze var būt noderīgāka HCC noteikšanā.Yan et al.parādīja, ka cfDNS pacientu ar HCC plazmā bija ievērojami augstāks nekā pacientiem ar aknu fibrozi un veselām kontrolēm.Salīdzinot ar AFP, sagaidāms, ka ctDNA būs labāks agrīnas HCC skrīninga marķieris.46 Prospektīvā pētījumā par 47 šķidrām biopsijām, kurās tika pārbaudīta cfDNS un proteīns populācijas populācijā, tika pierādīts, ka tās ir efektīvas, lai atšķirtu pacientus ar HCC no pacientiem bez HCC.Novērojot 331 ultraskaņas normālu un AFP negatīvu pacientu, cfDNS jutība un specifiskums HCC diagnosticēšanai bija attiecīgi 100% un 94%, tāpēc cDNS varēja noteikt HCC asimptomātiskiem HBsAg seropozitīviem indivīdiem.Yeo48 pētījumā pacientiem ar HCC tika konstatēts augsts RASSF1A promotora hipermetilācijas biežums (92,5%).Turklāt Xu et al.izveidoja diagnostikas modeli, lai prognozētu HCC, izmantojot specifisku metilēšanas marķieru paneli ar specifiskumu un jutību attiecīgi 90, 5% un 83, 3%.Panelis ļauj atšķirt pacientus ar HCC no pacientiem ar citām aknu slimībām, kas ir labāk nekā AFP.Viņi arī atklāja, ka parastajām kontrolēm, kuru rezultāts bija pozitīvs, var būt HCC riska faktori, piemēram, HBV infekcija vai alkohola lietošanas vēsture.25 Mēs izvirzām hipotēzi, ka augsta riska faktori HCC var veicināt cfDNS hipermetilāciju, kas pēc tam veicina HCC progresēšanu, un tādējādi cfDNS var būt galvenā loma augsta riska grupu skrīningā.Cai et al.apkopo visu ctDNS mutāciju klāstu un piedāvā stabilu stratēģiju audzēja slodzes novērtēšanai pacientiem.49 Šī stratēģija var identificēt audzēja veidošanos vidēji 4, 6 mēnešus pirms attēlveidošanas izmaiņām, un tā ir uzrādījusi labāku diagnostisko veiktspēju, salīdzinot ar seruma biomarķieriem AFP, AFP-L3 un PIVKA-II.cDNS testēšanas diagnostiskā vērtība ir pierādīta, kad attēla novērtējums nav pieejams, tāpēc cDNS testēšana ir vērtīga agrīnas HCC diagnostikā augsta riska grupās.Nesen zinātnieki izmantoja NGS tehnoloģiju, lai analizētu daudzfaktoru ģenētiskās variācijas rādītājus (tostarp 5-hidroksimetilcitozīnu, 5′-motīvu, fragmentāciju, nukleosomu pēdas, HIFI) 3204 klīniskajos paraugos un cfDNS.50 atkārtoti apstiprināti HIFI modeļi ar trim neatkarīgiem vilcienu, testu un testu komplektiem uzrādīja stabilu un uzticamu HCC un ne-HCC populāciju diskrimināciju ar attiecīgi 95,79% un 95,42% jutīgumu HCC specifiskajos testos un testu komplektos.Dzimumi bija attiecīgi 95,00% un 97,83%.HIFI metodes diagnostiskā vērtība ir augstāka nekā AFP, lai atšķirtu HCC no cirozes.Turklāt ctDNS izmanto arī ķirurģiskā ārstēšanā.Atsushi et al.noteica ctDNS pirmsoperācijas seruma līmeni pacientiem ar HCC un konstatēja, ka recidīvu biežums un ekstrahepatisko metastāžu biežums cDNS pozitīvajā grupā bija ievērojami augstāks nekā cDNS negatīvajā grupā, un cDNS līmenis bija būtiski korelēts.ar audzēja progresēšanu.51 Tā kā ctDNS ir ļoti jutīgs biomarķieris, tas var paredzēt HCC spēju iebrukt traukos.Wang et al.veica visa genoma sekvencēšanu 46 pacientiem ar HCC, un daudzfaktoru analīze parādīja, ka cDNS varianta alēļu biežuma sliekšņa vērtība invāzijai mikrovaskulāros ir 0,83%, jutība 89,7% un specifiskums 80,0%.neatkarīgs riska faktors mikrovaskulārai invāzijai rezektējamā HCC, kas liecina, ka cDNS var palīdzēt vadīt optimālu ārstēšanu.Visbeidzot, ctDNS ir pilnībā iesaistīts HCC rašanās un attīstības procesā, un to var izmantot agrīnai skrīningam, ķirurģiskai novērtēšanai un slimības uzraudzībai.
CTC ir ļaundabīgas šūnas, kas iegūtas no primārajiem audzējiem vai metastāzēm, kas metastējas asinsritē.Audzēja šūnas izdala matricas metaloproteināzes (MMP), kas noārda bazālo membrānu, ļaujot audzēja šūnām tieši iekļūt asins un limfas traukos.Tomēr lielāko daļu CTC ātri izvada anoikis, imūnsistēmas uzbrukums vai bīdes stress.53 Epitēlija-mezenhimālā pāreja (EMT) ļauj CTC viegli izolēt no primārajiem audzēja audiem, iebrukt kapilāros un iegūt ievērojami uzlabotu dzīvildzi, metastāzes, invazivitāti un zāļu rezistenci.Pētījumi ir parādījuši, ka primārajos metastātiskajos audzējos dažādās audzēja šūnās ir dziļa neviendabība.Tādējādi CTC analīze var radīt visaptverošu izpratni par audzēja šūnu neviendabīgumu.54
Ar HCC saistīto CTC specifiskie marķieri ir glipikāns-3 (GPC3), asialoglikoproteīna receptors (ASGPR), epitēlija šūnu adhēzijas molekula (EpCAM) un ar cilmes šūnām saistītie marķieri, piemēram, CD44, CD90, 55 un starpšūnu adhēzijas molekula 1 (ICAM111).) .56 GPC3 marķieris ir šūnu membrānā nostiprināts proteīns, ko klīniski izmanto HCC patoloģiskai analīzei un raksturošanai.57 GPC3 ekspresija ir biežāka HCC audzēja šūnās ar vidēju un zemu diferenciāciju un veicina ekstrahepatisko migrāciju;turklāt GPC3+ CTC klātbūtne norāda uz metastātisku HCC.58 ASGPR ir transmembrānas proteīns, kas ekspresēts tikai uz hepatocītu virsmas un ir ļoti izteikts labi diferencētā HCC.EpCAM ir viens no visbiežāk izmantotajiem ar membrānu saistītajiem proteīniem, lai uztvertu CTC.EpCAM ir identificēts kā HCC šūnu virsmas marķieris ar cilmes šūnu īpašībām, kas korelē ar dažādām HCC klīniski patoloģiskām iezīmēm, piemēram, asinsvadu invāziju, novērtēto AFP līmeni un aknu vēža progresējošu stadiju Barselonas slimnīcā (BCLC).60 CTC EMT fenotips ir ļoti metastātisks.54 EMT procesi CTC veicina HCC metastāzes.EMT marķieru, piemēram, vimentīna, vērpjot, E-box cinka pirkstu saistīšanas (ZEB) 1, ZEB2, gliemežu, gliemežu un E-kadherīna, ekspresija ir pētīta ar aknām iegūtiem CTC no HCC pacientiem.58 Cheng izstrādātā CanPatrol™ sistēma [61] klasificēja CTC trīs fenotipiskās apakšgrupās, pamatojoties uz galvenokārt izteiktiem marķieriem: epitēlija fenotips (EpCAM, CK8/18/19), mezenhimālais fenotips (vimentīns, saritināts) un jaukti fenotipi.176 pacientiem kopējais CTC bija pārāks par AFP, diferencējot HCC no labdabīgas aknu slimības.Kopējā CTC, AFP un kopējā kopējā CTC un AFP AUC vērtības bija 0,774 (95% TI, 0,704–0,834), 0,669 (95% TI, 0,587–0,750) un 0,821 (95% TI, 0,7866–0. ).), attiecīgi.CTC klasifikācija, pamatojoties uz EMT, var paredzēt HCC diagnozi, agrīnu recidīvu, metastāzes un īsāku kopējo laiku.
Pašlaik CSC noteikšanas metodes ietver fizikālās metodes un bioloģiskās metodes.Fizikālās metodes, ko bieži dēvē par bagātināšanu, pamatojoties uz biofizikālajām īpašībām, galvenokārt ir atkarīgas no CSC fizikālajām īpašībām, piemēram, izmēra, blīvuma, lādiņa, mobilitātes un deformējamības.Atkarībā no fizikālajām īpašībām ir dažādas metodes, piemēram, uz filtrēšanu balstītas sistēmas, dielektroforēze utt. Pēdējā, kas pazīstama arī kā imūnafinitātes bagātināšana, galvenokārt balstās uz antigēna un antivielu saistīšanos, jo metode izmanto antivielas pret audzēja specifiskiem biomarķieriem. piemēram, EpCAM, ASGPR, cilvēka epidermas augšanas faktora receptors 2 (HER2), prostatas specifiskais antigēns (PSA), cilvēka pancitokeratīns (P-CK) un karbamoilfosfāta sintāze 1 (CPS1).62 Cits veids, ko sauc par bezbagātināšanas metodi, izmanto plūsmas citometriju, lai atšķirtu CTC no leikocītiem, pamatojoties uz augstāku kodola un citoplazmas attiecību un izmēru.Pašlaik vienīgais FDA apstiprinātais tests CTC noteikšanai ir Cell-Search™ sistēma, kas izmanto EpCAM šūnu virsmas marķieri. Tomēr kombinēta uz marķieriem balstīta CTC noteikšana varētu palielināt pozitivitātes līmeni.54 Antivielu maisījums pret ASGPR un CPS1 sasniedza 91% CTC noteikšanas līmeni HCC pacientiem.63 Zhang et al izmantoja CTC-Chip ar antivielām pret ASGPR, P. -CK un CPS1, un diferencēja HCC pacientus no tiem, kuriem ir labdabīga aknu slimība vai vēzis, kas nav HCC. biežums un CTC skaits ar TNM stadiju.65 Guo et al atklāja, ka no CTC iegūtais PCR rādītājs bija paaugstināts 125/171 (73%) pacientam, kuriem AFP līmenis bija <20 ng/ml ar jutību 72,5% un specifiskums 95,0%, salīdzinot ar 57,0% un 90,0% AFP pie robežvērtības 20 ng/ml.66 AFP un CTC kombinācija var uzlabot HCC noteikšanu.45 Tiek uzskatīts, ka CTC ir priekšrocības salīdzinājumā ar AFP agrīnā grupu skrīningā. augsts HCC risks. Tomēr kombinēta uz marķieriem balstīta CTC noteikšana varētu palielināt pozitivitātes līmeni.54 Antivielu maisījums pret ASGPR un CPS1 sasniedza 91% CTC noteikšanas līmeni HCC pacientiem.63 Zhang et al izmantoja CTC-Chip ar antivielām pret ASGPR, P. -CK un CPS1, un diferencēja HCC pacientus no tiem, kuriem ir labdabīga aknu slimība vai vēzis, kas nav HCC. biežums un CTC skaits ar TNM stadiju.65 Guo et al atklāja, ka no CTC iegūtais PCR rādītājs bija paaugstināts 125/171 (73%) pacientam, kuriem AFP līmenis bija <20 ng/ml ar jutību 72,5% un specifiskums 95,0%, salīdzinot ar 57,0% un 90,0% AFP pie robežvērtības 20 ng/ml.66 AFP un CTC kombinācija var uzlabot HCC noteikšanu.45 Tiek uzskatīts, ka CTC ir priekšrocības salīdzinājumā ar AFP agrīnā grupu skrīningā. augsts HCC risks.Tomēr uz marķieriem balstīta kombinēta CTC noteikšana var palielināt pozitīvo rezultātu procentuālo daļu.54 Anti-ASGPR un CPS1 antivielu maisījums sasniedza CTC noteikšanas līmeni 91% pacientiem ar HCC.63 Zhang et al.izmantoja CTC-Chip ar antivielām pret ASGPR, P-CK un CPS1, kā arī 100% atšķīra pacientus ar HCC no tiem, kuriem ir labdabīga aknu slimība vai ne-HCC.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. CTC ar TNM stadiju biežums un skaits.65 Guo et al atklāja, ka no CTC iegūtais PCR bija paaugstināts 125/171 (73%) pacientam, kuriem AFP līmenis bija <20 ng/ml ar jutību 72,5% un specifiskumu 95,0% salīdzinājumā ar 57,0% un 90,0% AFP pie robežlīmeņa 20 ng/ml.66 AFP un CTC kombinācija var uzlabot HCC noteikšanu.45 Tiek uzskatīts, ka CTC ir priekšrocības salīdzinājumā ar AFP agrīnā skrīningā. grupas.ar augstu HCC risku.Tomēr uz marķieriem balstīta kombinēta CTC noteikšana var palielināt pozitīvo rezultātu procentuālo daļu.54 Anti-ASGPR un CPS1 antivielu maisījums sasniedza 91% CTC noteikšanas līmeni pacientiem ar HCC.63 Zhang et al.izmantoja CTC mikroshēmas ar antivielām pret ASGPR, P-CK un CPS1 un atšķīra pacientus ar HCC no labdabīgas aknu slimības un ne-HCC ar 100%.64 Vanga pētījums identificēja 60% EpCAM+ CTC 42 HCC pacientiem un atklāja nozīmīgu korelāciju starp sastopamību un CTC skaitu TNM stadijā. 65 Guo 等人发现,在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中,CTC 衍生的PCR 评分升高,敏感性为72.5%,特异性为95.0%,而AFP 在截止值为20 ng/ml 时的特异性为57.0% 和90.0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 , , ctc 衍生 pcr 评分 , 敏感性 为 为 72.5%, 为 95.0%, AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20ng/ml 时 的 特异性 为 57,0% 和 90,0%。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. atklāja, ka 125/171 (73%) pacientam ar AFP līmeni <20 ng/ml, no CTC iegūtās PCR vērtības bija paaugstinātas ar 72,5% jutību un 95,0% specifiskumu, bet AFP bija robežspecifiskā līmenī. bija 20 ng/ml.ml bija 57,0% un 90,0%.66 ORP un CTC kombinācija uzlabo HCC noteikšanu.Tiek uzskatīts, ka 45 CTC ir pārāki par AFP augsta riska HCC populāciju agrīnā skrīningā.Tādējādi CTC pozitīvām un augsta riska HCC grupām CTC pārbaude regulāri jāapvieno ar ultraskaņas un AFP noteikšanu.Tomēr CTC tiek uzskatīti par svarīgiem audzēja metastāžu un recidīvu prognozētājiem, un CTC noteikšana nav neatkarīgi ieteicama kā diagnostikas instruments.62 Tāpēc CTC var kalpot par labāku prognozējamu biomarķieri nekā citi pašlaik izmantotie marķieri. Džou et al atklāja, ka pacientiem ar paaugstinātu EpCAM+ CTC un regulējošo T šūnu skaitu bija lielāks HCC atkārtošanās risks nekā tiem, kuriem bija mazs CTC skaits, ar atkārtošanās koeficientu 66,7% pret 10,3% (P < 0,001).67 Par līdzīgu pētījumu ziņoja Zhong et al.68 Turklāt Qi atklāja, ka 101 no 112 pacientiem (90,81 %) ar HCC, tostarp tiem, kuriem slimība ir agrīnā stadijā, bija pozitīvi attiecībā uz CTC un ka ļoti mazi HCC mezgliņi tika atklāti pēc 3. līdz 5 novērošanas mēnešiem. Džou et al atklāja, ka pacientiem ar paaugstinātu EpCAM+ CTC un regulējošo T šūnu skaitu bija lielāks HCC atkārtošanās risks nekā tiem, kuriem bija mazs CTC skaits, ar atkārtošanās koeficientu 66,7% pret 10,3% (P < 0,001).67 A līdzīgu pētījumu ziņoja Zhong et al.68 Turklāt Qi atklāja, ka 101 no 112 pacientiem (90,81 %) ar HCC, tostarp tiem, kuriem slimība ir agrīnā stadijā, bija pozitīvi attiecībā uz CTC un ka ļoti mazi HCC mezgliņi tika atklāti pēc 3. 5 mēnešu novērošana. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Džou et al atklāja, ka pacientiem ar paaugstinātu EpCAM+ CTC un regulējošām T šūnām bija lielāks HCC atkārtošanās risks nekā tiem, kuriem bija zems CTC, ar recidīvu biežumu 66,7% pret 10,3% (P <0,001)67.Līdzīgu pētījumu veica Zhong et al.68. Turklāt Qi atklāja, ka 101 no 112 pacientiem (90,81%) ar HCC, tostarp tiem, kuriem slimība bija agrīnā stadijā, bija CTC un ka pēc 3 līdz 5 mēnešu novērošanas tika atklāti ļoti mazi HCC mezgliņi. Zhou 等 人 发现 , 与 ctc 数量 较 少 患者 相比 , , Epcam+ ctc 和 调节性 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 的 风险 更 高 , 复发率 分别 为 66,7% 和 10,3% (p <0,001)。 分别 为 66,7% 和 10,3% (p <0,001)。。 为 为 66,7% 和 10,3% (p <0,001) Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 , epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 , 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001)………………………………… Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Džou et al.atklāja, ka pacientiem ar paaugstinātu EpCAM+ CTC un regulējošām T šūnām bija lielāks HCC atkārtošanās risks, salīdzinot ar pacientiem ar mazāku CTC skaitu, ar recidīvu biežumu attiecīgi 66,7% un 10,3% (P <0,001).Par līdzīgu pētījumu ziņoja Zhong et al.68 Turklāt Qi atklāja, ka 101 no 112 HCC pacientiem (90,81%), tostarp pacientiem ar agrīnu slimību, bija pozitīvi CTC rezultāti un pēc 3 apmeklējumiem tika konstatēti ļoti mazi HCC mezgliņi.Novērošana līdz 5 mēnešiem.Viņi arī konstatēja CTC 12 pacientiem ar hronisku HBV infekciju un konstatēja mazus HCC audzējus 5 mēnešu laikā 2 CTC pozitīviem pacientiem.69 Tādējādi CTC var izmantot, lai prognozētu HCC, 70 bet tos var izmantot biežāk kā prognozējošos biomarķierus.
Tāpat kā cfDNS, cfRNS izdalās asinsritē caur dažādām sistēmām.Šīs molekulas perifērajās asinīs ir izcelsmes vēža audi.Salīdzinājumā ar marķieriem, kas atklāti ar neinvazīvām metodēm, cfRNS ir dinamiskāk regulētas, specifiskas audiem un bagātīgas ārpusšūnu vidē.Daudzos pētījumos ir ziņots par 71 miRNS (miRNS) nozīmīgumu un diagnostisko vērtību HCC.miRNS ir endogēnas nekodējošas RNS (ncRNS), kas regulē dažādas molekulāri bioloģiskās aktivitātes, inhibējot mērķa messenger RNS (mRNS) translāciju.miRNS atrodas apoptotiskos ķermeņos, kas iekapsulēti eksosomās, taču tie var arī stabili saistīties ar seruma proteīniem un lipīdiem perifērajās asinīs, un tos var izmantot, lai novērtētu HCC.MikroRNS ir iesaistītas aknu reģenerācijā, lipīdu metabolismā, apoptozē, iekaisumos un HCC attīstībā.72 Onkogēnas miRNS, piemēram, miR-21, miR-155 un miR-221, ir labi zināmas HCC.Jo īpaši miR-21 spēlē galveno lomu kolagēna sintēzē ekstracelulārajā matricā un fibrozē un veicina hepatokarcinoģenēzi, aktivizējot hematopoētiskās cilmes šūnas.72,73 audzēju nomācošās miRNS HCC ietver miRNA-122, miRNA-29, Let-7 saimi un miRNA-15 saimi.Let-7 saime sastāv no daudzām audzēju supresoru miRNS, kuru mērķis ir RAS saime.MiR-15 saimē ietilpst miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 un miR-497, kurām ir komplementāras sekvences noteiktām mRNS.Turklāt HCC agrīnai skrīningam ir svarīgas arī garas nekodējošas RNS (lncRNS) un apļveida RNS (cirRNS).lncRNS ir visplašākā ncRNS klase, ieskaitot mRNS līdzīgās ncRNS, un ir iesaistītas daudzu cilvēku slimību patoģenēzē.LncRNS spēlē regulējošu lomu aknu mikrovidē un hroniskās aknu slimībās.74 CircRNS ir arī ncRNS klase ar vairākām funkcijām gēnu ekspresijas regulēšanā.Nesen cirRNS tika uzskatītas par HCC diagnostikas instrumentiem.
Cirkulējošajai brīvajai RNS ir ievērojama stabilitāte, tostarp izturība pret temperatūru, pH un RNāzi, kas padara fnRNS izolēšanu no perifērajām asinīm mazāk nogurdinošu, izmantojot standarta RNS attīrīšanas metodes.Visbiežāk izmantotās metodes ietver NGS, microarray un RT-qPCR.NGS ļauj izmērīt mikroRNS visā genomā.Tomēr šī metode ir dārga, un analīze nav standartizēta.Turpretim RT-qPCR ir lēts, ātri pastiprina nukleīnskābes un piedāvā daudzas priekšrocības, piemēram, lielāku jutību, lielāku precizitāti, plašāku dinamisko diapazonu un mazāk paraugu.Mikroarrays ir vēl viena metode, ko izmanto miRNS noteikšanai, pamatojoties uz jutīgu un specifisku mērķa miRNS hibridizāciju ar komplementārām DNS zondēm 75 , taču mikromasīvu datu analīze ir laikietilpīga.
Ir ziņots, ka cirkulējošie miR-122 un Let-7 ir potenciāli noderīgi, lai diagnosticētu agrīnas stadijas HCC augsta riska grupās, marķierus pacientiem ar HBV saistītiem pirmsvēža mezgliem un agrīnas stadijas HCC.76 Cai et al.atklāja, ka Let-7 ģimenes locekļiem (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 un miR-199a/b) ir hroniskas saslimšanas risks. HCC pacientiem ar hepatītu.Let-7 saime var kalpot kā efektīvs surogātbiomarķieris, lai prognozētu HCC attīstību augsta riska grupās, kas saistītas ar hronisku C hepatītu. 77 miR-122 ir augsta diagnostikas precizitāte agrīnā HCC noteikšanā pacientiem ar aknu cirozi.78 Serumā cirkulējošais MiR-107 ir novērtēts arī HCC agrīnā stadijā 79 un ir parādījis labu potenciālu augsta riska populācijās.Zhou et al ziņoja, ka miRNS panelis (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a un miR-801) var atšķirt HCC no hroniska B hepatīta (CHB) un cirozes. jutība bija attiecīgi 79,1% un 75%, un specifiskums 76,4% un 91,1%.80 Ar HBV saistītā HCC gadījumā mēs atklājām, ka miR150 līmenis bija ievērojami pazemināts, salīdzinot ar hroniskiem HBV pacientiem bez HCC (jutība 79,1%, specifiskums 76,5%).-224 bija paaugstināts HCC, salīdzinot ar veselām kontrolēm, un apakšgrupu analīzes parādīja augstāku līmeni pacientiem ar HCC, kas saistīts ar HBV.Ar B hepatītu saistītu cirozi un HCC pacienti identificēja siRNS klasifikatoru, kas satur septiņas diferencēti izteiktas siRNS, kas var noteikt HCC dažādās kontrolēs;AUC diapazons agrīnā skrīningā ir labāks nekā AFP brīvprātīgajiem.Viņi atklāja, ka četras miRNS (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p un miR-365a-3p) var atšķirt pacientus ar HCC no pacientiem bez HCC.Piecas pārmērīgi ekspresējošas miRNS (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p un miR-148a-3p) tiek uzskatītas par iespējamām HBV infekcijām HCC, cirozes un CHB biomarķieros, jo īpaši. miR-34a-5p var būt biomarķieri aknu cirozei85 un var būt potenciāli biomarķieri agrīnai HCC skrīningam augsta riska populācijās.Visvairāk pētītā lncRNS HCC ir ļoti aktivizēta aknu vēža (HULC) gadījumā.Citi pētījumi ir parādījuši, ka HULC, kas cirkulē HCC pacientiem, var izmantot kā diagnostikas marķieri, jo šī lncRNS ir ļoti regulēta HCC pacientiem, salīdzinot ar veseliem indivīdiem.71,86 Citu lnRNS vidū LINC00152 tiek uzskatīta par labāko diagnostikas lncRNS, pateicoties tās augstajam AUC, jutīgumam un specifiskumam.86 Vienā pētījumā LINC00152 perifēro asiņu ekspresija pakāpeniski palielinājās no normālas veselas kontroles līdz pacientiem ar CHB un cirozi, un visbeidzot bija visaugstākā HCC.Pētījumi par circSMARCA5 ekspresiju pacientu ar HCC plazmā ir parādījuši progresējošu HCC ekspresijas samazināšanos, sākot no hepatīta līdz cirozei un pirmsvēža bojājumiem.87 ROC līkņu analīze apstiprināja šo cirRNS potenciālu, lai atšķirtu pacientus ar hepatītu vai aknu cirozi no pacientiem ar HCC, īpaši tiem, kuriem AFP līmenis ir zem 200 ng/ml.Turklāt Zhu analizēja 13 617 cikliskās RNS plazmas paraugos no HBV saistītu HCC pacientu un apstiprināja, ka 6 cikliskās RNS HCC un ar HBV saistītās cirozes gadījumā tika izteiktas atšķirīgi, kas liecina, ka cRNS var būt labvēlīgas.marķieri agrīnai augsta riska grupu skrīningam, piemēram, tiem, kas saistīti ar aknu slimībām, sklerozes pacientiem.88
Eksosomas ir membrānas pūslīši ar diametru 40–160 nm;vairākas intracelulāras vezikulas saplūst ar šūnu membrānu un tiek izlaistas ārpusšūnu matricā.Tie satur daudz aktīvu komponentu, tostarp lipīdus, proteīnus, RNS un DNS, un tiem ir galvenā loma saziņā starp šūnām gan HCC, gan ne-HCC šūnām.89,90 eksosomas regulē HCC progresēšanu, aktivizējot hepatocītu fibroblastus un zvaigžņu šūnas, imūnās šūnas, normālus hepatocītus un HCC šūnas.91 Audzēja mikrovidē audzēja šūnas ražo lielu skaitu eksosomu, kas tiek pārnestas no vēža šūnām uz nenobriedušām šūnām, kas savukārt ir iesaistītas onkoģenēzē, degradācijā un šūnu signalizācijā.92 Pētījumi liecina, ka eksosomas var pārnest onkogēnus uz normālām šūnām patoloģisko procesu laikā, kas var būt viens no audzēja invāzijas un metastāžu mehānismiem.93 Eksosomu loma vēža progresēšanā var būt dinamiska un specifiska vēža tipam. 89 Eksosomas var internalizēt blakus esošās vai attālās šūnās, lai regulētu vairākus mērķa gēnus recipienta šūnās, kas var būt iesaistīti starpšūnu komunikācijas jonos un šūnu mikrovides mijiedarbībā. mediē šūnu signalizāciju un vielmaiņu.94 Eksosomu kravas molekulu raksturojums un dinamiskās izmaiņas tieši atspoguļo vecāku audzēju šūnu īpašības un dinamiskās izmaiņas,95 kas ir arī pamats eksosomu izmantošanai vēža diagnostikā un prognozēšanā, kā arī individuālās atbildes reakcijas uz pretvēža terapiju prognozēšanai. ..96
Tradicionālās laboratorijas metodes eksosomu izolēšanai un analīzei ir sarežģītas, daudzpakāpju un laikietilpīgas, tostarp ultracentrifugēšana, filtrēšana, izmēra izslēgšanas hromatogrāfija, imūnafinitātes attīrīšana, Western blotēšana, enzīmu saistītu imūnsorbcijas tests (ELISA), PCR un plūsmas analīze.Miniaturizētas sistēmas un laboratorijas mikroshēmas platformas, kurās izmanto mikro/nanotehnoloģiju, tiek plaši izstrādātas ātrai un ērtai eksosomu izolēšanai in situ.Nanodaļiņu izsekošanas analīze (NTA) ir plaši izmantota metode, lai raksturotu eksosomu izmēru un koncentrāciju, tostarp tādas metodes kā magnētiskās nanodaļiņas un polihidroksialkanoāti.Mikrofluidiskās un elektroķīmiskās metodes var arī ātri noteikt eksosomas ar augstu ražu.
Eksosomālie proteīni ir svarīgi marķieri HCC diagnostikai.Arbelaiz pētījumā 98 RasGAP SH3 saistošā proteīna (G3BP) un polimēru imūnglobulīna receptoru (PIGR) līmenis bija ievērojami paaugstināts HCC iegūtajās eksosomās, un abu proteīnu iespējamā kombinētā efektivitāte bija pārāka par AFP.Dzelzs pārslodze ir svarīgs faktors, kas veicina HCC attīstību.Tseng ziņoja, ka hepcidīnam var būt galvenā loma rezistencē pret HCC.99 Eksosomām, kas iegūtas no HCC pacientu serumiem, bija ievērojami lielāks hepcidīna mRNS variantu kopiju skaits nekā to veselajiem kolēģiem, kas liecina, ka hepcidīns var būt jauns diagnostikas biomarķieris HCC.14-3-3ζ proteīns eksosomās, ko ražo 100 HCC, var samazināt T šūnu aktivāciju, proliferāciju un diferenciāciju un var izraisīt T šūnu transformāciju regulējošās T šūnās, izraisot T šūnu izsīkumu.101 To apstiprina vairāki pētījumi, kuros pētīta audzēja izvairīšanās no imūnās uzraudzības, 102 kas var veicināt HCC audzēja ģenēzi.
Papildus ecRNS klātbūtnei plazmā vai serumā ar RNS bagātinātās eksosomas var izmantot neinvazīvai reāllaika stadijas noteikšanai agrīnā audzēja skrīningā un audzēja evolūcijas un reakcijas uz terapiju noteikšanai.Eksosomālās miRNS-21 līmenis asins serumā HCC grupā bija 2,21 reizi augstāks nekā CHB grupā, bet HCC grupā tas bija 5,57 reizes augstāks nekā veseliem cilvēkiem.Vanga pētījumā eksosomas ievērojami palielināja HCC, salīdzinot ar pacientiem ar cirozi ar AUC vērtībām 0,83 (95% TI 0,74–0,93) un 0,94 (95% TI 0,88–1,00).104 Iegūtie dati noskaidroja specifisku eksosomālu kravas molekulu iesaisti onkoģenēzes un HCC progresēšanas regulēšanā.105 MiR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 un miR-26a ekspresija serumā ir konsekventa.un metastāzes, un miR21 līmenis bija daudz augstāks HCC pacientiem nekā veseliem kontroles pacientiem un arī CHB pacientiem.102 LncRNS bija potenciāla diagnostiska vērtība HCC.Pētījumi ir parādījuši, ka eksosomās, kas iegūtas no HCC pacientu serumiem, ir ievērojami augstāks LINC00161, LINC000635 un lncRNS līmenis, kas aktivizēts, transformējot augšanas faktoru-β, nekā pacientiem bez HCC, un šīs lncRNS ir cieši saistītas ar TNM stadiju un audzēja tilpumu.110 Conigliaro et al.Tika konstatēts, ka CD90+ eksosomas ekspresē augstu lncRNAH19 līmeni, kas ievērojami palielināja asinsvadu endotēlija augšanas faktora (VEGF) izdalīšanos un VEGF-R1 receptoru veidošanos, tādējādi stimulējot angiogenēzi.93 CircRNS ir cita veida eksosomu ncRNS – izteiktas zemākos, bet stabilos līmeņos visās sugās, cirRNS arī uzrāda specifiskumu šūnu tipam, audu tipam, attīstības stadijai un regulējošai aktivitātei.111 cirRNS ir agrīna un minimāli invazīva vēža diagnostikas biomarķieri.112 Nesenie klīniskie pētījumi ir parādījuši, ka atsevišķu miRNS specifika HCC prognozēšanā nav ideāla.Tāpēc kompleksa noteikšana, izmantojot vairākus testus (piemēram, miR-122 un miR-48a kombinācijā ar AFP), var uzlabot agrīnas HCC identificēšanu un HCC diferenciāciju no cirozes.100
Pacienti ar CHB un aknu cirozi ir visizplatītākā augsta riska grupa HCC attīstībai.Augsta riska grupām, tiklīdz ir sasniegta ilgstoša virusoloģiskā reakcija, ir jāizstrādā rentabla uzraudzības stratēģija, kuras pamatā ir HCC risks, un agrīna skrīnings ir galvenais, lai uzlabotu HCC diagnostiku un ārstēšanu ar augstu izmaksu efektivitātes koeficientu2. ..Agrīnās vēža skrīninga metodēm ir daudz ierobežojumu: efektīvas agrīnās skrīninga metodes lielākajai daļai vēža veidu nav izstrādātas, un to ievērošana parasti ir zema.Salīdzinot ar tradicionālajām agrīnās skrīninga metodēm, šķidrās biopsijas tehnoloģijai ir acīmredzamas priekšrocības: viegla paraugu ņemšana, panraka noteikšana, laba paraugu reproducējamība un efektīva reakcija uz audzēja neviendabīgumu.Ņemot vērā ar šķidro biopsiju saistīto metožu rentabilitāti, to izmantošana HCC skrīningā nav regulāri pārbaudīta.Neskatoties uz progresu precīzā noteikšanā molekulārā līmenī, šķidruma biopsija ir dārga, lai noteiktu HCC mērķa pacientiem, ierobežojot tās plašo izmantošanu salīdzinājumā ar īpašām attēlveidošanas procedūrām, piemēram, ultraskaņu un magnētiskās rezonanses attēlveidošanu.113 114 Tomēr iepriekšējais pētījums parādīja, ka šķidrā biopsija uzrādīja ievērojamu ieguvumu kvalitātes koriģēto dzīves gadu (QALY) ziņā.115 Ir pierādīts arī šķidrās biopsijas priekšrocības agrīnas kuņģa un nazofarneksa karcinomas gadījumā.116 117 Pašreizējais viedoklis ir tāds, ka šķidrā biopsija var papildināt seruma biomarķierus un radioloģisko skrīningu audzēju noteikšanā un diagnostikā.117 118
Saskaņā ar pašreizējo literatūru, šķidruma biopsijas tehnoloģija ir uzrādījusi ievērojami augstāku jutīgumu un specifiskumu augsta riska grupu agrīnā aknu vēža skrīningā.Neatkarīgi no šķidruma biopsijas veida tā var atšķirt HCC no augsta riska personām bez HCC, kas liecina par agrīnas skrīninga nozīmi, jo ir acīmredzamas atšķirības starp augsta riska un veseliem indivīdiem.ctDNS ir īss pussabrukšanas periods, un to var izmantot, lai noteiktu HCC, tāpēc jebkuras izmaiņas audzēja cDNS var sniegt reāllaika konkrētus pierādījumus par audzēja progresēšanu, īpaši maziem audzējiem.Augsts ctDNS līmenis norāda uz vēža attīstību un izplatību un ir agrīns progresēšanas un atkārtošanās rādītājs.Turklāt, pamatojoties uz ctDNS rezultātiem, pacienti var saņemt individuālu ārstēšanu un novērošanu.119 Specifiskas metilēšanas vietas var būt labāks marķieris nekā AFP, lai agrīni identificētu HCC un cirozes mezgliņus.Rezecējamos HCC gadījumos augsts cDNS līmenis liecina par mikrovaskulāru invāziju un pēcoperācijas recidīvu un metastāzēm.Izmaiņas kopiju skaitā ir saistītas ar pacientu ar HCC izdzīvošanu.Var pieņemt, ka cDNS novērtējums var būt iesaistīts vispārējā HCC ārstēšanā, un cDNS var kalpot kā efektīvs terapeitiskās modulācijas indikators.Marķieri, kuru pamatā ir specifiskas ģenētiskās mutācijas ctDNS, ir pieņemti klīniskajās vadlīnijās, lai prognozētu efektivitāti un uzraudzītu zāļu rezistenci.ctDNS pārbaude var būt visnoderīgākais šķidrās biopsijas rīks agrīnai skrīningam.CTC ir arī galvenā loma augsta riska HCC grupu agrīnā pārbaudē.Dažādi ar HCC saistītu CTC marķieri ir īpaši svarīgi HCC rašanās, attīstības un atkārtošanās gadījumā.Kā membrānas pūslīši eksosomas ir iesaistītas starpšūnu sakaros, īpaši HCC šūnās.Cirkulējošās mikroRNS ir stabilas asinīs un tādējādi var būt noderīgākas agrīnai HCC skrīningam.Pakāpeniski tika atklāti eksosomālie proteīni un ar RNS bagātas eksosomas, un tika apstiprināta to paredzamā efektivitāte HCC.Interesanti, ka dažādas HCC etioloģijas var būt saistītas arī ar dažādām mutācijām, tāpēc mēs varam atlasīt dažādus biomarķierus agrīnai skrīningam, pamatojoties uz dažādām HCC etioloģijām.120
Tomēr pašreizējās šķidruma biopsijas metodes ir apšaubāmas stabilitātes ziņā un nevar patstāvīgi veikt agrīnu HCC skrīningu vai uzraudzību, taču tās joprojām var papildināt individuālu skrīningu un diagnozi.121 Kā šķidras biopsijas veids ctDNS, CTC, cfRNS un ar eksosomu saistītā AFP vai PIVKA-II noteikšanai un attēlveidošanai ir daudzsološi pielietojumi HCC agrīnā diagnostikā un prognozēšanā.Tomēr precīzs ctDNS izdalīšanās mehānisms asinīs vēl nav noskaidrots.CtDNS bioloģisko pamatīpašību atklāšana var atvieglot tās izmantošanu kā marķieri.Nelielais ctDNS daudzums cirkulācijā un stingras prasības par paraugu apstrādi ir izaicinājumi cDNS noteikšanas klīniskai ieviešanai HCC.Turklāt ģenētiskajām mutācijām nav specifisku pazīmju, kas ļauj precīzi identificēt kancerogēnus.Tā kā normālos audos ir arī vairāki ģenētiski un somatiski varianti, ģenētiskās mutācijas, kas identificētas ar šķidruma biopsiju, var būt ierobežotas noderīgas agrīnā HCC skrīningā.122 Precīzi definētu noderīgu gēnu mērķu un biomarķieru ierobežojumi, kas palīdz atšķirt cDNS no DNS, kas nav audzēja DNS, ir vissvarīgākie jautājumi cDNS izmantošanā.jutīgu un specifisku marķieru lietderības trūkums CTC noteikšanai.Tika atrastas tikai dzīvotspējīgas šūnas ar metastātisku potenciālu, un CSC bagātināto marķieru optimālā kombinācija nebija skaidra.CTC izolēšana kultūrai un to mutācijas profilu novērtēšana ir arī izaicinošs uzdevums.Tā kā problēmas ar eksosomu identificēšanu, izolēšanu un attīrīšanu, konkrētais molekulārais mehānisms joprojām nav skaidrs, un iepriekšējie pētījumi par eksosomu un HCC mehānismu nav bijuši padziļināti un veids, kā miRNS, lncRNS un proteīni tiek sakārtoti eksosomās. , un nav skaidrs, vai eksosomu uzņemšana ir īpaša veida process.Eksosomu izmantošana HCC diagnostikai un ārstēšanai joprojām ir preklīniskajā stadijā.Šķidrās biopsijas procedūru standartizācijas trūkums, piemēram, asiņu savākšanai izmantoto stobriņu veids, asins tilpums, paraugu uzglabāšana un noteikšana, izolēšana un bagātināšana, var liegt to izmantošanu ikdienas klīniskajā praksē, jo medicīnas centros pastāv atšķirības.Vēl ir jāizpēta šķidrās biopsijas efektivitāte agrīnā skrīningā, diagnostikā, efektivitātes novērtēšanā un HCC prognozēšanā, īpaši augsta riska grupām.Šķidrās biopsijas tehnoloģijai ir liels potenciāls, un ir paredzams, ka tuvākajā nākotnē to plaši izmantos aknu vēža klīniskajā praksē.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Globālā vēža statistika 2020. gadam: GLOBOCAN lēš saslimstību un mirstību no 36 vēža veidiem 185 valstīs.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Nacionālās veselības komisijas galvenā mītne.Primārā aknu vēža diagnostikas un ārstēšanas kritēriji (2022. gada izdevums) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Džou J, Sun H, Vans Z u.c.Vadlīnijas hepatocelulārās karcinomas diagnostikai un ārstēšanai (2019. gada izdevums).Aknu vēzis.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K u.c.Hepatocelulārās karcinomas klīniskās prakses vadlīnijas: Japānas aknu slimību biedrība, 2017 (JSH-HCC 4. vadlīnijas), 2019. gada atjauninājums.Aknu slimību rezervuārs.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Šķidruma biopsija hroniskas aknu slimības gadījumā.Anna Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Šķidrā krūts vēža biopsija: mērķtiecīgs pārskats.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Hepatocelulārās karcinomas uzraudzība: pašreizējā labākā prakse un turpmākie virzieni.Gastroenteroloģija.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Klīniskās vadlīnijas EASL-EORTC: hepatocelulārās karcinomas ārstēšana.J Heparīns.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Kombinētā AFP un HCCR-1 analīze kā noderīgi seroloģiskie marķieri mazās hepatocelulārās karcinomas gadījumā: perspektīvs kohortas pētījums.Dis Marks.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S u.c.Plazmas mikroRNS-125b diferenciālā ekspresija ar B hepatīta vīrusu saistītās aknu slimībās un B hepatīta vīrusa izraisītas hepatocelulārās karcinomas diagnostikas potenciāls.Aknu slimību rezervuārs.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Alfa-fetoproteīna bioloģija un nozīme hepatocelulārajā karcinomā.Aknu starpt.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N u.c.Klīniskās vadlīnijas hepatocelulārās karcinomas ārstēšanai Āzijas un Klusā okeāna reģionā: 2017. gada atjauninājums.Starptautiskā aknu slimību organizācija.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Sju Fei, Džan Li, He Vei u.c.Seruma PIVKA-II diagnostiskā vērtība atsevišķi vai kombinācijā ar AFP Ķīnas pacientiem ar hepatocelulāro karcinomu.Dis Marks.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Nesīkšūnu plaušu vēža neplazmas humorālā šķidruma biopsija: tuvāk audzējam!šūna.2020;9(11).doi: 10,3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Šķidruma biopsija: pašreizējais stāvoklis un nākotnes perspektīvas.Ārstēšana Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P u.c.Vēža biopsija uz šķidruma bāzes: multimodāls diagnostikas instruments klīniskajā onkoloģijā.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleīnskābes cilvēka plazmā.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM u.c.Uzlabota cirkulējošā audzēja DNS noteikšana ar fragmenta lieluma analīzi.Zinātne tulko medicīnu.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Cirkulējošā audzēja DNS fragmenta garums.PLOS gēni.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Cirkulējošā audzēja DNS: daudzsološs biomarķieris šķidruma bāzes vēža biopsijā.mērķa audzējs.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Cirkulējošā audzēja DNS noteikšana cilvēka ļaundabīgo audzēju agrīnās un vēlīnās stadijās.Zinātne tulko medicīnu.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehess G. Šķidruma biopsija cietā vēža mutāciju prognozēšanai: patologa skatījums.J Biotehnoloģija.2019; 297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Agrīna audzēja noteikšana, veicot plazmas DNS skrīningu: ažiotāža vai cerība?Beļģijas klīniskās tiesības.2020. gads;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Hepatīta vīrusa un novecošanās ietekme uz DNS metilēšanu cilvēka hepatokarcinoģenēzē.Histopatoloģija.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647


Izlikšanas laiks: 23. septembris 2022